Ⅱ型单纯性疱疹病毒DNA疫苗的研究

【摘要】HSV-2是一种性传播病毒，目前为止，世界范围内超过5亿人感染。HSV-2是嗜神经病毒，具有感染多样性，终生潜伏于宿主感觉神经元和腰骶背根神经节，能引起生殖器疱疹和宫颈癌，并协助HIV-1病毒的传播。目前主要应用于临床治疗的阿昔洛韦等药物虽能减轻HSV-2感染，但不能阻止疾病复发，预防病毒的传播。因此，研制安全、长期有效的HSV-2疫苗己成为预防病毒感染的关键。目前研究表明，体液免疫并不能彻底清除HSV-2，对于预防原发感染及限制复发感染，细胞免疫比体液免疫更为重要。HSV-2疫苗的未来发展也是以诱导产生细胞免疫应答为主，与体液免疫两者平衡。DNA疫苗的出现带来了新的曙光，目前已经广泛用于人类病毒疫苗临床实验中，例如流感病毒、乙肝病毒和艾滋病病毒。动物实验显示接种HSV-2DNA疫苗可以诱导产生较为平衡的体液免疫和细胞免疫。本实验选择gD作为抗原，由于gD是HSV-2感染细胞的关键的糖蛋白之一，在病毒穿膜的环节中发挥重要的作用，其本身具有较丰富的抗体表位和T细胞表位，可以诱导产生相对较高的中和抗体和T细胞免疫应答，是HSV-2疫苗研究的首选。同时，为能够加强细胞免疫，本实验选择了另一种抗原UL25，研究表明UL25表位肽可以增殖活化HSV-2CD8+T细胞。将UL25与gD2基因融合，作为DNA疫苗，可诱导产生更强的细胞免疫和体液免疫。由于DNA疫苗免疫原性较弱，所以本实验选用IL-28B作为HSV-2DNA疫苗的佐剂，以期能有效的解决这一难题，从而抑制和清除HSV-2病毒感染。IL-28B属于IFN-λs家族，同其它成员一样，能阻止或限制病毒感染。Morrow等人使用IL-28作为HIV和流感H1N1DNA疫苗的佐剂，研究表明IL-28B在小动物模型能增强获得性细胞免疫应答，促进记忆细胞的增殖，增强CTL杀伤作用。综上所述，为了获得更强的细胞免疫应答与体液免疫，制备安全有效的HSV-2疫苗，本论文分别构建了gD2和gD2UL25两种DNA疫苗，以IL-28B作为佐剂，共免疫Balb/c小鼠，与FI-HSV-2和rAd-gD疫苗形式比较，研究DNA疫苗的免疫原性和清除HSV-2病毒的能力，评价其在致死剂量病毒攻击Balb/c小鼠模型中的保护效果；同时，评价IL-28B能否作为HSV-2DNA疫苗的佐剂，增强免疫应答，预防和抵抗HSV-2病毒的感染。实验结果表明DNA疫苗能诱导产生HSV-2特异的体液免疫和细胞免疫，降低生殖道病毒载量，微弱的减轻攻毒小鼠发病程度，但免疫反应较弱，保护能力有限，虽能抑制并清除HSV-2病毒，但是效果不佳。与IL-28B共免疫后，能够明显增强特异性IgG及IgG2a抗体的产生，增强与Th1相关联的抗原特异性免疫应答，较低水平地促进中和抗体的产生，显著性的增强IFN-γ的分泌，增强细胞免疫应答，较为明显的提高DNA疫苗清除生殖道HSV-2病毒的能力，显著减轻小鼠的发病情况，缩短病程，使小鼠痊愈，表明IL-28B可以作为HSV-2DNA疫苗佐剂，增强其抵抗HSV-2病毒能力。同时，融合的多基因质粒gD2UL25比gD2产生更强的体液免疫和细胞免疫，显著的提高小鼠抵御致死剂量HSV-2病毒的能力。
【作者】张则强；
【导师】姜春来；
【作者基本信息】吉林大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】Ⅱ型单纯性疱疹病毒；DNA疫苗；糖蛋白D；UL25；白介素28B；

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